Megazyme試劑盒将目标抗體包被於微孔闆中,制成固相載體,向微孔中分别加入标準品或标本,其中的目标連接於固相載體上的抗體結合,然後加入微生物化的目标抗體,将未結合的生物素抗體洗淨後,加入标記和親和素,在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成黃色,顔色的深淺和樣品中的目标呈正相關,用酶标儀在450nm波長下測定吸光度,計算樣品濃度。
該試劑盒經過改進後,更加快速和靈敏,靈敏度是傳統己糖激酶法的兩倍,成本低,試劑配制後可穩定保存2年, 採(cǎi)用試劑盒形式,包含檢測必需的所有酶,提供計算軟件,使數據處理更方便,包含标準品。原理上,将單位體積的谷物面粉提取物或發酵肉湯培養基在條件下用底物混合物孵育,通過加入弱堿性溶液終止反應並(bìng)使溶液變色,測定400nm下的吸光度值,該值與樣品中α-澱粉酶的含量直接相關。
Megazyme試劑盒操作步驟
①從(cóng)室溫平衡20min後(hòu)的鋁箔袋中取出所需闆條,剩餘闆條用自封袋密封放回4℃。
②設(shè)置标準品孔和樣本孔,标準品孔各加不同濃(nóng)度的标準品50μL;
③樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋(shì)液40μL;空白孔不加。
④除空白孔外,标準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶标記的檢測(cè)抗體100μL,用封闆膜封住反應孔,37℃水浴鍋(guō)或恒溫箱溫育60min。
⑤棄去液體,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌(dí)液,靜置1min,甩去洗滌(dí)液,吸水紙上拍幹,如此重複(fù)洗闆5次。