Megazyme試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育並*洗滌,用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成黃色,顔色的深淺和樣品中的白細胞介素呈正相關,用酶标儀在450nm波長下測定吸光度,計算樣品濃度。
該檢測試劑盒的主要在於(yú)直接提供高純度的酶,酶的活力是标準化的,而标準化的酶的活力在測量抗性澱粉是*的。該試劑盒提供的酶都是穩定的液體,可以保存到試劑盒有效期,並(bìng)且是直接應用液,不需要使用前再溶解。
一、樣(yàng)品收集、處(chù)理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和内毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液後,3000轉離心10分鍾将血清和紅(hóng)細胞迅速小心地分離。
2.血漿(jiāng):EDTA、檸(níng)檬酸鹽或肝素抗凝。
3.細胞上清液:3000轉離(lí)心10分鍾去除顆(kē)粒和聚合物。
4.組織勻漿(jiāng):将組織加入适量生理鹽水搗(dǎo)碎。3000轉離心10分鍾取上清。
5.保存:如果樣本收集後不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存於(yú)-20℃,避免反複凍融,在室溫下解凍並(bìng)確保樣品均勻地充分解凍。
二、操作注意事項
1.Megazyme試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鍾。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬於正常現象,水浴加熱使結晶*溶解後再使用。
2.實(shí)驗中不用的闆條應立即放回自封袋中,密封(低溫幹(gàn)燥)保存。
3.按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,結果乘以5才是樣本實際(jì)濃度。
4.嚴格按照說明書中标明的時間(jiān)、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體(tǐ)組分使用前充分搖(yáo)勻。