Coriell Institute細胞的實驗注意事項和培養操作介紹

　　Coriell Institute細胞凍存和複蘇實驗原理：細胞凍存及複蘇的基本原則是慢凍快融，可以保存細胞活力，目前細胞凍存多採用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞内的水分滲出細胞外，減少細胞内冰晶的形成，從而減少由於冰晶形成造成的細胞損傷。

        細胞應採(cǎi)用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間内即融化，避免由於(yú)緩慢融化使水分滲入細胞内形成胞内再結晶對細胞造成損傷。

　　一、細胞凍(dòng)存和複(fù)蘇實驗注意事項：

　　1、從增殖期到形成緻密的單層(céng)細胞以前的培養細胞都可以用於(yú)凍存。

　　2、将凍(dòng)存管放入液氮容器或從(cóng)中取出時，要做好防護工作
，以免凍(dòng)傷。

　　3、凍(dòng)存和複(fù)蘇用新配制的培養液。

　　二、Coriell Institute細胞培養操作：

　　1、複蘇細胞：将含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜，換液並(bìng)檢查細胞密度。

　　2、細胞傳(chuán)代：如果細胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳(chuán)代培養。

　　3、棄去培養上清，用不含鈣(gài)、鎂離(lí)子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　4、加1ml消化液於(yú)培養瓶中，置於(yú)37℃培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並(bìng)脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。

　　5、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養基，輕輕打勻後(hòu)吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養液後(hòu)吹勻。

　　6、待細胞生長(zhǎng)狀态良好時，可進行細胞凍(dòng)存。